紅細胞裂解液

產品簡介:紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),也稱ACK Lysis Buffer,是一種用於從人或鼠等的血液或組織樣品中裂解並去除無細胞核紅細胞的溶液。本裂解液經過優化配方,在裂解紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。 本裂解液的主要有效成分為氯化銨。本裂解液不適用於有細胞核紅細胞的裂解本裂解液經過無菌處理,處理過的血液或組織細胞樣品可以用於後續的原代培養、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規的分析和檢測。產品內容:貨號 PMK0011-120 PMK0011-500紅細胞裂解液 120ml 500ml使用步驟:對於組織細胞樣品:1.新鮮組織經過膠原酶或胰酶等消化處理,通過適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。2.加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml,則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。3.400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。4.如果發現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響後續的一些檢測。5.洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,重懸沉淀,400-500g離心2-3分鐘,棄上清。可再重復1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。6.根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀後即可進行計數等後續實驗。對於組織細胞樣品無需洗滌的快速操作步驟:1.新鮮組織經過膠原酶或胰酶等消化處理,通過適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。2.對於0.2ml細胞沉淀加入1ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。3.加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,混勻。4.400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。5.如果發現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響後續的一些檢測。說明:對於常規步驟,多一步洗滌過程中的離心,但可以節省洗滌液的用量,並且洗滌效果也更好一些,同時不需要大體積的離心管。快速步驟少瞭一次離心,但洗滌效果略差一些,同時需要大體積的離心管。對於血液樣品:1.取新鮮抗凝血,400-500g離心5分鐘,離心棄上清。2.加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml,則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。註意:對於鼠的血液,裂解1-2分鐘已經足夠,對於人的外周血,宜延長裂解時間至4-5分鐘,並且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。3.400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。4.如果發現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響後續的一些檢測。5.洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,重懸沉淀,400-500g離心2-3分鐘,棄上清。可再重復1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。6.根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀後即可進行計數等後續實驗。對於血液樣品無需洗滌的快速操作步驟:1.每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。註意:對於鼠的血液,裂解4-5分鐘已經足夠,對於人的外周血,宜延長裂解時間至10分鐘,但通常不宜超過15分鐘,並且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。2.加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,混勻。3.400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。4.如果發現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響後續的一些檢測。5.根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀後即可進行計數等後續實驗。說明:對於常規步驟,多一步洗滌過程的離心,但可以節省洗滌液的用量,並且洗滌效果也更好一些,同時不需要大體積的離心管。快速步驟少瞭一次離心,但洗滌效果略差一些,同時需要大體積的離心管。註意事項:本裂解液為無菌產品,請註意保持無菌,使用本產品時宜在超凈工作臺內進行。如果經過紅細胞裂解液處理後的樣品後續用於總RNA的提取,在處理細胞時不必使用經過DEPC處理過的溶液。本產品僅限於專業人員的科學研究用,不得用於臨床診斷或治療,不得用於食品或藥品,不得存放於普通住宅內。為瞭您的安全和健康,請穿實驗服並戴一次性手套操作。

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